柯薩奇病毒B IgM檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
通用名稱:柯薩奇病毒B IgM檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名稱:Coxsackie virus B IgM ELISA
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/T
產(chǎn)品貨號:EIA5175
產(chǎn)品品牌:德國DRG
預(yù)期用途
柯薩奇病毒B IgM抗體檢測試劑盒可用于定性檢測人血漿和血清中的柯薩奇病毒B(CoxB)IgM抗體。
柯薩奇病毒簡介
柯薩奇病毒屬于一種稱為腸病毒的病毒,特別是它們是小核糖核酸病毒。它們分為A和B兩大類。大多數(shù)柯薩奇病毒感染并不嚴(yán)重。它們通常僅引起輕微的體征和癥狀,例如發(fā)燒,皮疹,喉嚨痛,關(guān)節(jié)痛和頭痛。癥狀通常持續(xù)約一周??滤_奇病毒感染經(jīng)常發(fā)生在幼兒中。A組病毒與無菌性腦膜炎,感冒,急性出血性結(jié)膜炎和急性心肌病有關(guān),B組與急性心肌炎和脊髓灰質(zhì)炎樣麻痹有關(guān)。
尤其與柯薩奇B型病毒相關(guān)的綜合征是胸膜炎,也被稱為博恩霍爾姆病或惡魔性癲癇病,表現(xiàn)為嚴(yán)重的胸膜胸痛,有時伴有腹痛和嘔吐,自覺性腦膜炎,感冒以及心肌或心包感染。
近的免疫化學(xué)技術(shù)已用于通過IgM的ELISA試驗對CoxB感染進(jìn)行早期診斷,作為近期感染的血清學(xué)標(biāo)志。
檢測原理
用來自組織培養(yǎng)的天然柯薩奇B病毒抗原包被微孔板,其中包含其主要亞型。在初次孵育中,用稀釋的樣品處理固相,如果存在抗原,則捕獲抗CoxB IgM。洗掉樣品的所有其他成分后,在第二次孵育中,通過添加抗過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的抗hIgM抗體來檢測結(jié)合的抗CoxB IgM。固相上捕獲的酶作用在底物/色原混合物上,產(chǎn)生的光信號與樣品中存在的抗CoxB IgM抗體的量成比例。
因此,樣品中IgM的存在可以通過能夠區(qū)分陰性和陽性樣品的臨界值來確定。在試驗中直接在孔中進(jìn)行IgG抗CoxB的中和,以阻止由于此類抗體在IgM測定中的干擾。
組成成分
名稱 | 數(shù)量 | 成分 |
包被板 | 1×12×8 | 可拆,包被有來自組織培養(yǎng)的天然柯薩奇病毒B抗原 |
陰性質(zhì)控 | 1×4ml | 即用型,淡黃色。 |
陽性質(zhì)控 | 1×4ml | 即用型,綠色。 |
濃縮洗滌液 | 1×60ml | 濃縮型(20×), 含PBS緩沖液. |
酶聯(lián)物 | 1×16ml | 即用型,紅色 |
底物液 | 1×16ml | 含TMB |
終止液 | 1×15ml | 含0.3M的H2SO4 |
樣本稀釋液 | 2×60ml | 即用型 |
中和試劑 | 1×8ml | 含山羊抗hIgG。 |
實驗所需材料不提供
1. 校準(zhǔn)的微量移液器(1000、100和10ul)和一次性塑料吸頭
2. EI*水(除臭或去離子水,用木炭處理以除去用作消毒劑的氧化性化學(xué)品)
3. 計時器
4. 吸水紙
5. 恒溫培養(yǎng)箱
6. 酶標(biāo)儀,450nm(讀數(shù))和620-630nm
7. 洗板機(jī)
8. 渦流混合器
實驗前準(zhǔn)備
1. 檢查印在外部標(biāo)簽(主容器)上的試劑盒的失效日期。如果過期,請不要使用。
2. 檢查液體成分是否未被可見的顆?;蚓奂镂廴尽?/p>
3. 用無菌塑料移液器吸取少量的鉻(TMB),以檢查其是否為無色或淺藍(lán)色。
4. 檢查運輸中是否沒有破損,箱子(主容器)內(nèi)沒有液體溢出。檢查包含微孔板的鋁袋是否未刺破或損壞。
5. 溶解報告的校準(zhǔn)物的內(nèi)容。
6. 如上所述稀釋20x濃縮洗滌溶液的所有內(nèi)容物。
7. 讓所有其他組分達(dá)到室溫(約1小時),然后將所有液體試劑渦旋輕輕混合。
8. 按照制造商的說明,將ELISA恒溫箱設(shè)置在+ 37℃并通過用稀釋的洗滌液灌注來準(zhǔn)備洗板機(jī)。設(shè)置正確的洗滌周期數(shù)(如在儀器驗證中找到的那樣)。
9. 檢查酶標(biāo)儀是否已打開,或確保在讀數(shù)前至少20分鐘將其打開。
10. 如果使用自動工作站,請打開電源,檢查設(shè)置,并確保使用正確的測定規(guī)程。
11. 檢查微量移液器是否設(shè)置為所需的體積。
12. 檢查所有其他設(shè)備是否可用并準(zhǔn)備就緒。
13. 如果出現(xiàn)問題,請勿繼續(xù)進(jìn)行測試并通知主管。
質(zhì)量控制
每當(dāng)使用試劑盒時,都要對質(zhì)控品和校準(zhǔn)品進(jìn)行驗證檢查,以驗證測定的性能是否符合IVDD指令98/79 / EC的預(yù)期和要求。
控制以下數(shù)據(jù)是否匹配:
校驗 | 要求 |
空白孔 | <0.100 OD 450nm值 |
陰性質(zhì)控 | 消隱后<0.200平均OD 450nm值, 變異系數(shù)<30% |
陽性質(zhì)控 | OD 450 nm> 0.500 |
如果測試結(jié)果符合上述要求,請繼續(xù)進(jìn)行下一部分。如果沒有,請不要繼續(xù)進(jìn)行以下操作:
問題 | 校驗 |
空白孔 >0.100 OD 450nm值 | 1. 在測試過程中沒有污染鉻/底物溶液 |
陰性質(zhì)控 消隱后>0.200 OD 450nm值, 變異系數(shù)>30% | 1.洗滌程序和洗板機(jī)設(shè)置是否符合資格預(yù)審研究的要求; 2.在使用前要使用正確的洗滌液并且已經(jīng)對洗板機(jī)進(jìn)行了底漆處理; 3.分析過程中沒有做過任何錯誤(分配陽性質(zhì)控而不是陰性質(zhì)控); 4.沒有由于陽性樣品或酶聯(lián)物的溢出而對陰性質(zhì)控或其孔造成污染; 5.微量移液器沒有被陽性樣品或酶聯(lián)物污染; 6.洗衣機(jī)針頭沒有被堵塞或部分阻塞。 |
陽性質(zhì)控 <0.500 OD 450nm | 1.該程序已正確執(zhí)行; 2.其分配沒有做錯(分配錯誤的質(zhì)控); 3.洗滌程序和洗衣機(jī)設(shè)置是否符合資格預(yù)審研究的要求; 4.沒有發(fā)生陽性質(zhì)控的外部污染。 |
結(jié)果計算
如果柯薩奇病毒B IgM抗體檢測試劑盒測試有效,則通過陰性質(zhì)控(NC)的平均OD 450 nm值通過下式確定的臨界值(Co)計算結(jié)果:臨界= NC + 0.250
重要說明:當(dāng)結(jié)果計算是由ELISA自動化工作站的操作系統(tǒng)執(zhí)行時,請確保使用正確的公式生成正確的結(jié)果解釋。
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