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                                                                                  多巴胺試劑盒（生物胺類）

（德國IBL：貨號：RE59161）

通用名稱：多巴胺ELISA試劑盒

英文名稱：dopamineELISA

產品規(guī)格：96T

多巴胺試劑盒（生物胺類）預期用途：

可用于人血漿和尿液中多巴胺的體外定量檢測，可手動操作，也可自動操作。進一步的研究表明：此試劑盒還可用于組織勻漿和細胞培養(yǎng)上清液的研究。

前言簡介：

兒茶酚胺類激素腎上xian素、去甲腎上xian素和多巴胺主要由腎上腺髓質、交感神經系統(tǒng)和大腦產生。它們幾乎影響所有的組織，并與其它激素和神經系統(tǒng)一起參與各種生理過程的調節(jié)。在許多疾病中，兒茶酚胺激素及其代謝產物間甲腎上xian素和去甲變腎上xian素的分泌量都會增加，因而這些激素可用于疾病的診斷。所以，這些激素的檢測對于疾病的診斷及神經系統(tǒng)腫瘤疾病的具有重要意義。它主要用于嗜鉻細胞瘤的診斷，當然也用于成神經細胞瘤和神經節(jié)細胞瘤的診斷。因為在實驗一開始時有提取步驟，所以用戶可使用所有動物材料進行實驗。此試劑盒可檢測大鼠、小鼠或其它動物，所有動物的兒茶酚胺的化學結構相同。

檢測原理：

利用的是ELISA的夾心法。微孔中包被了羊抗兔抗體。在溫育時間之內，加入的抗體可直接與抗原分子上的一個表位結合。樣品中的抗原與酶標二抗（可與抗原分子上的不同表位結合）在包被孔中溫育。加入底物液后，溶液所顯示的顏色強度與樣品中抗原的量成正比。樣品的結果可直接用標準曲線確定。

貯存與穩(wěn)定性：

運輸環(huán)境和儲存環(huán)境溫度為2-8℃，避免熱源或太陽直射。樣品的儲存與穩(wěn)定性及試劑的準備將在相關章節(jié)中闡述。開封的試劑盒在有效期內穩(wěn)定，前提是要將試劑盒用袋子密封并儲存于2-8℃的環(huán)境下。

實驗所需器材（但試劑盒不提供）：

1、移液器（10；10-100；100-1000μL）

2、軌道搖床（200-900rpm）

3、旋渦混合器

4、帶儲器的8通道移液器

5、洗滌瓶，自動或半自動包被板清洗系統(tǒng)

6、酶標儀，405nm(參考波長：620-650nm)

7、雙蒸水或去離子水

8、吸水紙，取樣吸頭，計時器

9、樣品稀釋用試管

檢測步驟：

1、在一次性試管內，用釋放緩沖液以1:51的比例稀釋提取的標準品，質控品和尿液樣本（如：10ul提取樣本+500ul的釋放緩沖液）

2、在包被板的每一微孔中加入75μL剛配置好的COMT酶溶液，輕輕振蕩。

3、將預稀釋的標準品，質控品和尿液樣本加100ul至相應孔內血漿樣本直接加100ul于相應孔內在此步驟中，將槍頭直接觸碰COMT酶溶液，顏色會轉為粉紅色，輕輕混勻。

4、每孔中加入50μL多巴胺抗血清。

5、蓋板。在振蕩器（400-600rpm）上18-25℃的環(huán)境下溫育120min

6、棄去孔內反應液，每孔用250-300μL已稀釋好的洗滌液洗板6次。

7、每孔加入100μL酶聯(lián)物

8、蓋板。在軌道搖床（400-600rpm）上18-25℃的環(huán)境下溫育60min

9、棄去孔內反應液，用250-300μL已稀釋好的洗滌液洗板6次。

10、加底物液和終止液時，其時間間隔應相同

11、每孔加入200μL底物液

12、在軌道搖床（400-600rpm）上18-25℃的環(huán)境下溫育40min。如果自動操作時的溫度超過25℃時，則應相應的將溫育時間縮短至30min。

13、每孔加入50μLPNPP終止液以終止底物反應，輕輕振蕩包被板以充分混合試劑成分。

14、加終止液后60min之內405nm處讀取OD值。（參考波長：620-650nm）

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