登革熱IgG檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
產品詳細
中文名稱 | 登革熱IgG檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法) |
英文名稱 | Dengue virus IgG ELISA |
產品貨號 | RE58671 |
產品規(guī)格 | 96T |
檢測樣本 | 血清、血漿 |
適應物種 | 人 |
預期用途 | 可用于人血清、血漿中抗登革熱病毒IgG抗體的定性檢測 |
產品品牌 | 德國IBL |
供應商家 | 深圳市科潤達生物工程有限公司 |
ELISA試劑盒預期用途
登革熱IgG抗體ELISA檢測試劑盒可用于人血清、血漿中抗登革熱病毒IgG抗體的定性檢測。
登革熱IgG檢測試劑盒組成成分
名稱 | 數(shù)量 | 成分 |
微孔板 | 12×8可拆板條 | 包被有登革熱2型抗原,真空密封于鋁鉑金屬袋中 |
樣品稀釋液 | 1瓶x100ml | 內含100ml樣品稀釋用緩沖液,pH2±0.2,液體為黃色,待用,白蓋 |
終止液 | 1瓶x15ml | 內含15ml硫酸,0.2mol/l;待用,紅蓋 |
洗滌液20×濃縮 | 1瓶x50ml | 含20倍濃縮的樣品洗滌液,pH7.2±0.2,白蓋 |
酶聯(lián)物 | 1瓶x20ml | HRP標記的兔抗人IgG,藍色,待用,黑蓋。 |
底物液 | 1瓶x15ml | TMB,待用,黃蓋。 |
陽性質控 | 1瓶x2ml | 黃色,待用,紅蓋 |
臨界質控 | 1瓶x3ml | 黃色,待用,綠蓋 |
陰性質控 | 1瓶,2ml | 黃色,待用,藍蓋 |
試劑盒檢測原理
登革熱IgG抗體ELISA檢測試劑盒的定性酶免檢測利用的ELISA技術。微孔板上預先包被了結合樣品相關抗體的登革熱病毒2型抗原。洗板除去未結合的樣品物質后,加入辣根過氧酶標記的抗人IgG酶聯(lián)物。這一酶聯(lián)物可與捕獲到的登革熱病毒特異性抗體結合。加入能產生藍色反應產物的TMB底物液后,如果顯示藍色則可知已形成免疫復合物。所顯示顏色的強度與樣品中登革熱病毒特異性IgG抗體的量成正比。加入硫酸以終止反應,以便產生黃色的終點顏色。用一酶標儀在450m處讀取OD值。
登革熱IgG檢測所需材料(試劑盒內未提供)
★ | 可在450/620nm處讀數(shù)的酶標儀 |
★ | 37℃恒溫箱 |
★ | 自動或半自動洗板機 |
★ | 取樣吸頭(10µl和100µl) |
★ | 旋渦混合器 |
★ | 去離子水或雙蒸水 |
★ | 試管 |
★ | 計時器 |
登革熱IgG檢測試劑盒檢測步驟
實驗開始之前仔細閱讀操作步驟,嚴格遵守操作步驟才可以獲得可靠的實驗結果。如果這實驗是在ELISA自動系統(tǒng)上進行,為了避免洗板的影響,我建議在洗板步驟時,洗板3次改成洗板5次,洗滌液從300µl增加到350µl。實驗開始之前,應當在試劑盒提供的結果單上標記好所有的樣品和質控品。取適當數(shù)量的板條置于板架上。
請至少做以下幾個孔:
1孔(例A1)做空白對照孔
1孔(例B1)做陰性質控
2孔(例C1+ D1)做臨界質控
1孔(例E1)做陽性質控
我們建議您將質控和病人樣品做雙份檢測。照說明書給出的實驗步驟進行操作,并避免不同步驟之間的時間隔無明顯差別。加每一質控品和樣品時都應當用新的取樣吸頭。把恒溫箱調至37 ± 1℃
1. | 控品和已稀釋好的樣品分別100µl加入到相應的微孔中,留下A1做空白對照孔 |
2. | 蓋板 |
3. | 37±1℃下溫育1h±5min |
4. | 溫育后,移去粘性金屬板,棄取孔內反應液,用300µl洗滌液洗板3次。避免反應孔中的液體濺出。每次洗板間的浸潤時間都應大于5秒。后在吸水紙上拍干。 注意:洗板步驟很重要,洗板不充分將可能導致結果不精確或錯誤的OD值。 |
5. | 除空白孔外,在每一微孔中都加入100µl登革熱抗IgG酶標物,蓋板。 |
6. | 室溫下溫育30,避免太陽直射 |
7. | 重復步驟4 |
8. | 在每一微孔中加入100µlTMB底物液 |
9. | 室溫下(20-25℃)避光溫育15min |
10. | 按加TMB底物液的順序和速度在每一微孔中加入100µl終止液。 溫育之后,包被板內試劑的顏色由藍色變?yōu)辄S色 注意:高陽性的病人樣品會引起染色劑沉淀。這些沉淀物會影響OD值的讀取。例如:我們建議按1:1的比例用生理鹽水預先稀釋樣品。然后按1:100的比例用稀釋液稀釋樣品,并將結果乘以2。 |
11. | 加終止液后30min之內在450/620nm處讀取OD值。 |
登革熱IgG檢測試劑盒樣本要求
樣本采集后(保存在2-8℃)應該在5小時內用于檢測,否則應該保存在-20~-70℃。避免反復凍融,不推薦使用滅活的樣本。
樣品稀釋:樣品使用樣品稀釋液以1:101的比例進行稀釋。
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